DIA（Data Independent Acquisition）磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)
產(chǎn)品簡介
蛋白質(zhì)磷酸化是一種常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾形式，蛋白質(zhì)磷酸化主要涉及與絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的羥基側(cè)鏈形成磷酸酯鍵，這些磷酸化過程在細胞信號傳導(dǎo)和細胞命運調(diào)控過程中起著關(guān)鍵作用。磷酸化蛋白組的研究不僅僅是針對單一蛋白質(zhì)或少數(shù)蛋白質(zhì)的磷酸化位點分析，而是旨在全面地鑒定和量化細胞、組織或生物體中所有蛋白質(zhì)的磷酸化狀態(tài)。通過磷酸化蛋白組可以了解蛋白表達及發(fā)揮功能的調(diào)控機制，以及發(fā)現(xiàn)與疾病相關(guān)的磷酸化蛋白質(zhì)，進而為新藥物的研發(fā)提供潛在的靶點。
發(fā)生磷酸化修飾的氨基酸上共價連接磷酸基團，其分子質(zhì)量會增加79.97Da。基于數(shù)據(jù)非依賴采集（Data-Independent Acquisition，DIA）技術(shù)，無偏向性采集質(zhì)譜掃描范圍內(nèi)所有信號，可測定分子量是否發(fā)生79.97Da的質(zhì)量偏移，從而檢測磷酸化修飾肽段及位點。
技術(shù)優(yōu)勢
1.基于DIA數(shù)據(jù)采集模式，大大減少高豐度干擾，全面采集高低豐度信號，數(shù)據(jù)覆蓋度顯著提高。
2.提供上游激酶分析，助力客戶發(fā)現(xiàn)潛在的藥物靶點。
3.系統(tǒng)解決方案-提供蛋白組和磷酸化蛋白組聯(lián)合分析，實現(xiàn)科研一站式服務(wù)。
儀器平臺
TimsTOF fleX
Astral
TimsTOF Pro2
服務(wù)流程
分析內(nèi)容
標準分析內(nèi)容 | |
質(zhì)控評價 | QC樣本評價；組間樣本鑒定評價；樣本定量波動評價；DIA體系評價 |
蛋白質(zhì)鑒定分析 | 鑒定與定量結(jié)果統(tǒng)計；單個樣本蛋白質(zhì)鑒定結(jié)果統(tǒng)計；韋恩圖；主成分分析；蛋白質(zhì)豐度分析 |
差異蛋白分析 | 差異蛋白統(tǒng)計；火山圖；箱線圖；聚類熱圖 |
功能分析 | 亞細胞定位；GO富集分析；KEGG/Reactome通路分析；GSEA分析；轉(zhuǎn)錄因子分析；互作網(wǎng)絡(luò)分析； |
激酶分析 | 激酶注釋、激酶-底物關(guān)系分析、KSEA分析、激酶樹注釋 |
個性化分析 | 與客戶協(xié)商后按實際情況執(zhí)行 |
推薦組合
DIA蛋白組+磷酸化蛋白組
送樣建議
樣本類型 | 推薦起始量 | 建議樣品處理流程 |
細胞 | >5×106
| 貼壁細胞 1.傾掉培養(yǎng)基，用PBS清洗3次，加入胰酶； 2.消化好的細胞轉(zhuǎn)入EP管，室溫3000 g離心5 min，棄掉上清； 3.PBS清洗3次，上清吸凈，細胞沉淀立即-80℃冰箱儲存。 或者 1.傾掉培養(yǎng)基，用PBS清洗3次后加入裂解液； 2.細胞刮刮細胞培養(yǎng)板，收集細胞裂解液，立即-80℃冰箱儲存。 懸浮細胞 1.3000×g離心5min收集細胞沉淀； 2.PBS清洗3次，立即-80℃冰箱儲存。 |
動物組織 | >30mg | 1.取目標部位組織，迅速取材且大小均一，將組織切成0.5cm左右的小塊； 2.組織小塊浸入PBS，洗掉組織中殘留的血； 3.用無塵紙吸凈表面的液體，立即-80℃冰箱儲存。 |
植物組織 | >2g
| 1.選取干凈的目標部位組織，迅速取材且保證取材均一；將組織剪成0.5cm左右的小塊； 2.組織立即-80℃冰箱儲存。 |
微生物 | >120mg | 1.收集菌體培養(yǎng)物，3000g離心5min，棄掉培養(yǎng)基； 2.PBS清洗3次，保留細菌沉淀，-80℃冰箱儲存。 |
血清/血漿 | >100μL | 血清 取普通采血管收集血液，室溫靜置，上層洗出的液體即為血清。 血漿 取抗凝采血管收集血液，使血液與管壁充分接觸，1000×g 4℃離心10-15min，上層即為血漿。 |
案例分析
