PRM（PARALLEL REACTION MONITORING）靶向蛋白質組學
產(chǎn)品簡介
PRM（parallel reaction monitoring）靶向蛋白質組學是一項基于質譜檢測的全新精準靶向定量技術，具有特異性強、靈敏度高、準確性高等特點。
技術優(yōu)勢
PRM技術適用性廣，無物種限制，且通量高，可一次性檢測20-100個目標蛋白質，極大節(jié)省樣本及實驗成本。
靈敏度高，可達ppm級別，線性范圍可達5-6個數(shù)量級。
特異性高，可精細區(qū)分亞型、修飾位點、突變位點等精細序列差異。
PRM靶向蛋白質組學與Western Blot對比
Western Blot | PRM | |
實驗原理 | 抗原抗體結合，通過通過檢測抗體含量間接獲得目的蛋白表達量 | 通過質譜對目標蛋白質的肽段進行選擇性監(jiān)測和碎裂分析，對目標蛋白進行定量 |
檢測范圍 | 依賴抗體特異性，有物種限制 | 無物種限制 |
檢測通量 | 1個目標蛋白/次 | 20-100個目標蛋白/次 |
重復性 | 人工操作，干擾因素多 | 標準化儀器操作，可重復性好 |
儀器平臺
Thermo Q Exactive HF（X）
服務流程
推薦組合產(chǎn)品
DIA+PRM
PRM送樣建議
| 樣本類型 | 推薦起始量 | 建議樣品處理流程 |
細胞 | >5×106
| 貼壁細胞 1.傾掉培養(yǎng)基，用PBS清洗3次，加入胰酶； 2.消化好的細胞轉入EP管，室溫3000 g離心5 min，棄掉上清； 3.PBS清洗3次，上清吸凈，細胞沉淀立即-80℃冰箱儲存。 或者 1.傾掉培養(yǎng)基，用PBS清洗3次后加入裂解液； 2.細胞刮刮細胞培養(yǎng)板，收集細胞裂解液，立即-80℃冰箱儲存。 懸浮細胞 1. 3000×g離心5min收集細胞沉淀； 2.PBS清洗3次，立即-80℃冰箱儲存。 |
動物組織 | >15mg | 1.取目標部位組織，迅速取材且大小均一，將組織切成0.5cm左右的小塊； 2.組織小塊浸入PBS，洗掉組織中殘留的血； 3.用無塵紙吸凈表面的液體，立即-80℃冰箱儲存。 |
植物組織 | >50mg | 1.選取干凈的目標部位組織，迅速取材且保證取材均一；將組織剪成0.5cm左右的小塊； 2.組織立即-80℃冰箱儲存。 |
微生物 | >20mg | 1.收集菌體培養(yǎng)物，3000g離心5min，棄掉培養(yǎng)基； 2.PBS清洗3次，保留細菌沉淀，-80℃冰箱儲存。 |
血清/血漿 | >50μL | 血清 取普通采血管收集血液，室溫靜置，上層洗出的液體即為血清。 血漿 取抗凝采血管收集血液，使血液與管壁充分接觸，1000×g 4℃離心10-15min,上層即為血漿。 |
案例分析
顱內(nèi)動脈瘤（Intracranial aneurysm，IA）是一種人群內(nèi)發(fā)病率較高的疾病，占到普通人群的2-3%。目前針對IA的診斷，尚依賴于影像學判斷如數(shù)字減影血管造影（DSA），但DSA成本高、效率低，且DSA檢查的有創(chuàng)性和形態(tài)學參數(shù)的寬泛性并不適合精準醫(yī)學的要求。而目前針對IA，尚無可用于預測的標志物。
復旦大學劉曉慧課題組在EMBO Molecular Medicine雜志在線發(fā)表一篇題為：Circulating proteomic panels for risk stratification of intracranial aneurysm and its rupture的論文，通過DIA+PRM的全面血清標志物篩選及驗證方法，揭示了可能存在的顱內(nèi)動脈瘤臨床血清標志物以及疾病發(fā)生發(fā)展可能的機制。
研究者首先針對IA的手術切除組織和血清開展系統(tǒng)的DIA蛋白質組學研究，建立了目前已報導鑒定量全面的動脈瘤組織和血清輪廓譜，在組織和血清中分別鑒定到5915個蛋白質和1557個蛋白質，分別找到724個差異蛋白和144個差異蛋白。在此基礎上，在大規(guī)模血清隊列中進行PRM驗證，構建了一個全面的IA潛在血清蛋白質標志物數(shù)據(jù)庫。
